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川芎嗪对兔眼高压下视网膜神经节细胞和双极细胞损伤的  

2016-04-05 08:20:07|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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  关键词: 眼高压;视网膜神经节细胞;双极细胞;川芎嗪;

  摘 :目的  观察川芎嗪对慢性眼高压下视网膜神经细胞损伤的保护作用. 方法  20g L-1 甲基纤维素前房注射法建立兔慢性眼高压模型.4组分别给予生理盐水、川芎嗪注射液10mg kg-1 2.5g L-1 噻吗心安眼液和联合应用川芎嗪与噻吗心安,连续用药4wk.28d取眼球作光镜、电镜检查和光镜下细胞计数. 结果  生理盐水组模型眼节细胞数为(7.83±1.34)个/10格,双极细胞数为(10.66±1.63)个/;川芎嗪组模型眼节细胞数为(9.50±3.87)个/10格,双极细胞数为(12.50±2.73)个/;生理盐水组模型眼和川芎嗪组模型眼节细胞(P<0.05)与双极细胞(P<0.05)比较,有显著性差异.生理盐水组模型眼节细胞变性、坏死,锥、杆细胞外节紊乱,色素上皮不完整,川芎嗪组变化比生理盐水组轻,联合用药组变化最小. 结论  川芎嗪对慢性眼高压下视网膜神经节细胞和双极细胞具有保护作用.

       引言

      近年研究显示血管因素、血液流变学、血流动力学改变等各种因素造成的眼血流灌注减少是青光眼视网膜神经节细胞丢失的原因之一[1-4 .川芎嗪具有扩张小动脉、抗血小板凝集、降低血浆纤维蛋白原,改善血液粘稠度的作用[5 .本实验将川芎嗪应用于慢性眼高压模型,通过光镜、电镜检查和细胞计数,探讨川芎嗪对慢性眼高压下视网膜的影响,为临床应用提供依据.

      1 材料和方法

      1.1 材料  成年新西兰白兔24只,体质量45kg1216月龄,雌雄兼用.每只动物一眼作为模型眼,另眼作为对照眼.造模前用裂隙灯显微镜、直接眼底镜检查眼前节及眼底无异常;10g L-1 的卡因表面麻醉后,Schiotz眼压计连续测量眼压3d1 d-1 ,眼压均低于2.79kPa;动物方可采用.表面麻醉下吸出前房房水0.2mL后,模型眼注入20g L-1 甲基纤维素0.2mL,对照眼注入生理盐水0.2mL,以后注射1 wk-1 ,维持眼压在3.995.32kPa,具体操作参见Jia等[6 方法.动物随机分为4组,每组6.每日检查眼部,测眼压1 2d-1 .生理盐水组耳缘静脉注射生理盐水4mL1 d-1 ;川芎嗪组注射川芎嗪注射液10mg kg-1 1 d-1 ;噻吗心安组模型眼点2.5g L-1 噻吗心安眼液,2 d-1 ;联合用药组模型眼滴2.5g L-1 噻吗心安眼液,2 d-1 ,耳缘静脉注射川芎嗪10mg kg-1 1 d-1 .

      1.2 方法  28d静脉注射空气10mL处死动物,取眼球,上直肌缝线定位,剪开角膜后去掉晶体,Bouin氏液中固定24h,常规石蜡包埋,切片厚6μmHE染色,Olympus光学显微镜观察拍照.10×40倍下用10×10目网格计算10个方格中节细胞数目和1个方格中内核层细胞数目.计数部位取视盘颞侧水平部2个高倍视野处,每眼各计算3张切片,取平均值.每组各取一只兔模型眼和对照眼于视神经和上直肌连线垂直剖开眼球,去晶体后鼻侧半立即置于25g L-1 戊二醛液中,切成带视网膜的1mm×1mm×1mm的小块,10g L-1 四氧化锇后固定,乙醇系列脱水,Epon812包埋,超薄切片厚50nm,铅、铀染色,透射电镜观察拍照.

     统计学处理:细胞计数结果的数据用自身配对t检验和方差分析.

      1 -图5

     

  2 结果

      造模前兔眼平均眼压为(2.07±0.37kPa,各组之间眼压无显著差异(P>0.05.造模后4wk测得各时点模型眼眼压平均为生理盐水组(4.75±0.73kPa,川芎嗪组(4.33±0.93kPa,噻吗心安组(3.31±0.80kPa,联合用药组(2.83±0.68kPa.生理盐水组模型眼视网膜变薄,神经节细胞层和双极细胞层细胞层数减少(Fig1),细胞数目亦减少(Tab1.噻吗心安组模型眼病变比生理盐水组轻,节细胞及内核层细胞数目减少.川芎嗪组模型眼病变与噻吗心安组相似,神经纤维层空泡样变明显,内界膜层及神经纤维层胶质细胞增生(Fig2.联合用药组少数神经纤维层出现空泡样变,内核层核周间隙轻度扩大(Fig3),Muller纤维整齐、清晰,锥、杆细胞外节完整.联合用药组模型眼节细胞和双极细胞数目接近对照眼.方差分析四组之间的模型眼节细胞(P<0.01)与内核层(P<0.05)细胞计数均有显著差异性.

      1 兔视网膜神经节细胞和双极细胞计数分析 略

            透射电镜显示生理盐水组模型眼神经节细胞核固缩,有的核溶解,变成低密度的颗粒样结构.线粒体肿胀,嵴消失,胞质空泡变性.其他细胞器结构不清楚.内核层细胞核固缩,核周间隙扩大,染色质边集(Fig4.色素上皮失去连续性,部分色素细胞进入视网膜中央.内丛状层及神经纤维层出现淀粉样小体(Fig5.噻吗心安组模型眼部分神经节细胞线粒体肿胀,嵴消失.内核层核固缩,核周间隙扩大,Muller氏细胞结构完整,外核层变化不明显.川芎嗪组模型眼节细胞质空泡化,胞核电子密度低,或溶解吸收.双极细胞层核固缩,核周间隙扩大,锥、杆细胞外节节盘间隙变宽,排列紊乱.联合用药组模型眼变化不明显.

3 讨论

      兔眼视网膜对眼高压比较敏感,主要表现在节细 胞变性、坏死、数目减少,双极细胞空泡变性,色素上皮不完整等.Jia等[6 Liu等[7 用兔前房注入甲基纤维素造成相似的视网膜改变.本实验结果显示慢性眼高压28d之后生理盐水组细胞出现核固缩、核仁边集,胞质空泡化,以节细胞层和内核层变化明显.神经纤维崩解,外节紊乱,色素上皮不完整.神经纤维层出现淀粉样小体.节细胞数及双极细胞数明显低于对照眼节细胞和双极细胞数.病理变化与国内外文献相符合.

    青光眼视网膜损害的机制是复杂的,目前认为除眼高压之外视网膜血供减少是主要原因之一.引起血液供应减少的原因包括视乳头血管因素、血液流变学改变和血流动力学改变等[1-5 .Klaver等[1 首先报道了青光眼患者血液粘稠度增大,Trope等[2 后来证实了原发性开角型青光眼患者血液粘度大可能造成视乳头血液循环障碍,视神经受损.Ge等[3 的报道显示开角型青光眼血液流变学全面异常.许多作者对正常人和开角型青光眼患者的眼动脉、视网膜中央动脉,睫状后短动脉的血流进行测量,发现峰收缩压血流速度,舒张末期血流速度均减慢,阻力指数增加.其中Yoshio等[4 证明进行性视野缺损直接与血流速度变慢相关.

  已经证实川芎嗪可以抗血小板聚集和解聚已凝集的血小板,抗凝血,抗血栓形成及溶解血栓,扩张小动脉和增加心肌收缩力.近年的研究还显示川芎嗪可以降低血液粘稠度,减少血浆纤维蛋白原,改善血液高凝状态,增加心、脑、肾、耳等重要器官的血液流量的作用,该药副作用很小[5 .本研究将川芎嗪应用于经前房注射甲基纤维素法建立的慢性眼高压模型,生理盐水组模型眼与川芎嗪组模型眼节细胞和双极细胞计数有显著差异,提示川芎嗪对视网膜有良好的保护作用.其原因可能为川芎嗪扩张视网膜及视神经的供养血管,改善眼的血液供应.方差分析显示联合用药组与其他各组之间有明显差异,说明联合用药对视网膜的保护作用优于单独应用川芎嗪或噻吗心安.川芎嗪组模型眼平均眼压稍低于生理盐水组模型眼,川芎嗪是否通过降眼压作用而起到保护视神经的作用值得进一步研究.  

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